Is-sintesi tal-aċidu nuklejku titwettaq bl-użu tal-metodu tat-trigliċeridi tal-amide sialiku tal-fażi solida, fejn it-tarf 3′ tad-DNA jiġi immobilizzat fuq sottostrat tal-fażi solida u n-nukleotidi jiġu miżjuda fid-direzzjoni 3′ sa 5′ sakemm jiġi sintetizzat il-framment tad-DNA mixtieq. .Dan huwa differenti mis-sintesi tad-DNA bl-applikazzjoni tad-DNA polymerase.
It-tarf 3' tal-ewwel bażi huwa immobilizzat fuq CPG waqt is-sintesi, il-5'-OH tal-bażi li jmiss huwa protett b'di-p-tolyl trityl DMT, il-grupp amminiku fuq il-bażi huwa protett bl-aċidu benżojku u t-3' -OH imbagħad jiġi attivat b'kompost amino fosfat.Bażi 1 tal-5 5′-OH ta’ bażi 1 u 3′-OH tal-bażi li jmiss jiffurmaw trigliċeridi tal-fosfit, li mbagħad jiġi ossidizzat bil-jodju għal trigliċeridi tal-fosfat, il-protettant fuq it-tieni bażi 5′-OH jitneħħa minn iż-żieda ta 'aċidu dikloroaċetiku DM ċikli permezz taż-żieda tal-bażi li jmiss, u wara s-sinteżi l-protettant fuq il-5′-OH jitneħħa b'aċidu dgħajjef Il-framment jiġi skonnettjat mir-reżina solida b'idrossidu tal-ammonju kkonċentrat, il-protettant jitneħħa mill-bażi b'idrossidu ta 'l-ammonju kkonċentrat taħt tisħin, l-idrossidu ta' l-ammonju jitneħħa, il-framment jitnixxef bil-vakwu, u l-aċidu nuklejku jiġi ppurifikat permezz ta 'kromatografija likwida jew PAĠNA.
Passi tas-Sinteżi Oligo
Debblukkar
Il-5 tmiem DMT li jipproteġu grupp jitneħħa billi żżid soluzzjoni TCA.
Attivazzjoni
It-taħlit tal-attivatur mal-monomeru tal-oligonukleotide biex jifforma l-intermedjarju tal-monomeru tal-oligonukleotidi attiv.
Akkoppjar
Il-grupp hydroxyl 5-terminal jirreaġixxi mal-intermedjarju oligonucleotide attiv f'reazzjoni ta 'kondensazzjoni anti-ġenerattiva biex jifforma bond ta' trigliċeridi fosfit instabbli.
Limitazzjoni
Iż-żieda ta 'aġent ta' capping twettaq reazzjoni ta 'capping ta' aċetilazzjoni b'gruppi ta 'hydroxyl żejda li mhumiex involuti fir-reazzjoni ta' kondensazzjoni.
Ossidazzjoni
Iż-żieda ta 'soluzzjoni tal-jodju li jkun fiha l-ilma tirreaġixxi ma' bonds fosfit instabbli permezz ta 'ossidazzjoni biex jiffurmaw bonds trigliċeridi ta' aċidu fosforiku stabbli.
Clevage Cyanoethyl
Il-prodott ta 'l-aċidu nuklejku wara s-sinteżi, biż-żieda ta' soluzzjoni DEA biex tneħħi l-grupp cyanoethyl mill-bond tat-trigliċeridi tal-fosfat.
Imqasam & Deprotezzjoni
Il-frammenti ta' l-aċidu nuklejku huma maqtugħa mill-ġarrier tal-fażi solida billi żżid soluzzjoni ta' idrossidu ta' l-ammonju kkonċentrat u mbagħad imsaħħan biex jitneħħew il-gruppi protettivi mill-idroġenu tal-bażijiet.
Ħin tal-post: Nov-21-2022